大家好,乐天来为大家解答以下的问题,关于植物台盼蓝染色实验步骤,台盼蓝染色的操作方法 以及使用范围 优点这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、基本性质 中英文名称:台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝 分子式:C34H24N6O14S4Na4 分子量: 960.82 可溶于水(10mg/ml) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。
2、还常用于细胞是否存活。
3、活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。
4、机理 正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。
5、通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。
6、因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
7、台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
8、注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
9、 台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
10、 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
11、步骤 步骤:(来自supergama) 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。
12、使用时。
13、用PBS稀释至0.4%。
14、(也可买Gibco的成品); T$ d& ! h% l, E) Z) A- W 2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。
15、 3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
16、(终浓度0.04%) 4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
17、 1 e7 e* I* S) ^% X8 U$ K- _ 5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
18、 6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%其他 保存条件 室温保存 说明 有潜在致癌危险 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本文分享完毕,希望对大家有所帮助。
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